膠體金(colloidal gold),又稱金溶膠(gold solution),是指分散相粒子直徑在l—150nm之間的金溶膠,屬于多相不均勻體系,顏色呈桔紅色到紫紅色。膠體金可以作為標記物用于免疫組織化學,近10多年來膠體金標記已經發展為一項重要的免疫標記技術。膠體金免疫分析在藥物檢測、生物醫學等許多領域的研究已經得到發展,并越來越受到相關研究領域的重視。
膠體金的應用:
1、膠體金在電鏡水平的應用。膠體金應用電鏡水平的研究最早,發展最快,應用最廣泛。其最大優點是可以通過應用不同大小的顆?;蚪Y合酶標進行雙重或多重標記。直徑為3~15nm 膠體金均可用作電鏡水平的標記物。3~15nm的膠體金多用于單一抗原顆粒的檢測,而直徑15nm多用于檢測量較多的感染細胞。
2、膠體金在光鏡水平的應用。膠體金同樣可用做光鏡水平的標記物,取代傳統的熒光素、酶等。各種細胞涂片、切片均可應用。主要用于:①用單克窿抗體或抗血清檢測細胞懸液或培養的單層細胞的膜表面抗原。②檢測培養的單層細胞胞內抗原,③組織中或亞薄切片中抗原的檢測。 膠體金用于光鏡水平的研究,可以彌補其它標記物不可避免的本底過高和內部酶活性干擾等缺點。
3、膠體金在流式細胞儀中的應用。應用熒光素標記的抗體,通過流式細胞儀計數分析細胞表面抗原,是免疫學研究中的重要技術之一。但由于不同熒光素的光譜相互重疊,區分不同的標記困難,因此必須尋找一種非熒光素標記物,用于流式細胞計數。這樣可以同時進行幾種標記。該標記物必須能夠改變散射角,膠體金可以明顯地改變紅激光散射角,因而可以作為流式細胞儀的標記物之一。
4、凝集試驗:單分散的免疫金溶膠呈清澈透明的溶液,其顏色隨溶膠顆粒大小而變化,當與相應抗原或抗體發生專一性反應后出現凝聚,溶膠顆粒極度增大,光散射隨之發生變化,顆粒也會沉降,溶液的顏色變淡甚至變成無色,這一原理可定性或定量地應用于免疫反應。
5、免疫印跡技術(immunoblotting):免疫印跡是一種較新的免疫化學技術。用聚丙烯酰胺凝膠電泳將蛋白質分離,得到的區帶轉移至硝酸纖維素膜,然后用酶免疫法(或免疫熒光、RIA)進行定量。免疫膠體金也可用于該法的定量。轉移后的硝酸纖維素膜與某特異性的抗體保溫后,再與經葡萄球菌A蛋白致敏的膠體金溫育,徹底洗去多余的膠體金,根據膜上膠體金顆粒顏色深淺可測知樣品中的特異性抗原。
6、膠體金在肉眼水平的應用。膠體金取代傳統三大標記物,用于肉眼水平的免疫檢測中。除了膠體金本身具有的特點外,還有以下優點:①試劑和樣本用量極小,樣本量可低至1~2ul;②不需γ-計數器、熒光顯微鏡、酶標檢測儀等貴重儀器,更適于現場應用; ③沒有諸如放射性同位素、鄰苯二胺等有害物質參與;④實驗結果可以長期保存;⑤時間大大縮短,提高了檢測速度。金標過程中,無共價鍵形成,是一定離子濃度下的物理吸附。因此幾乎所有的大分子物質都可被金標記,標記后大分子物質活性不發生改變。實驗結果表明,膠體金的敏感性可達到 ELISA的水平。而結合銀染色時,檢測的敏感性更大大提高。
深芬儀器CSY-JA膠體金快速檢測儀應用膠體金免疫層析技術的原理,通過反射光譜法測試CT線強弱程度可檢測PCT、HIV、CRP、NT-proBNP、MYO、CPV、CDV、FPV等免疫層析膠體金法診斷卡條或乳膠條,干式分析法卡條或乳膠條等模塊制成的獸藥殘留、瘦肉精、抗生素殘留、動物疫病、農藥殘留、臨床疫病、水質安全、轉基因等有毒有害物質殘留項目。
膠體金快速檢測儀檢測項目:
1、獸藥殘留類:克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林、呋喃它酮、孔雀石綠、氯霉素、酰胺類、四環素、喹諾酮、磺胺、黃曲霉毒素B1、嘔吐毒素、三聚氰胺、重金屬鉛、重金屬鎘、重金屬銅、內酰胺類、喹乙醇、紅霉素、西地那非、他達拉非、布洛芬、安乃近、西布曲明、糖皮質激素、咖啡因、五氯酚鈉、頭孢氨芐、甲硝唑、慶大霉素、青霉素、鏈霉素、甲氧卞胺嘧啶、替米考星、甲砜霉素、賽跟定、己烯雌酚、阿苯達唑、氟苯尼考、地塞米松、甲基睪酮、睪酮、卡那霉素、新霉素、林可霉素、氯丙嗪、氫化可的松、阿維菌素、氧氟沙星、肉類摻假(摻雞肉)、妥布霉素、阿奇霉素、泰樂菌素、安普霉素、頭孢噻呋、克拉霉素、類固醇激素、痢菌凈、組胺、雙氯芬酸鈉、對乙酰氨基酚、吲哚美辛、阿莫西林、替米考新、金剛烷胺等獸藥殘留及抗生素殘留;
2、農藥殘留類:菊酯類、百菌清、百草枯、乙草胺、毒死蜱、多菌靈、殺菌劑、甲拌磷、甲草胺、咪鮮胺、無根水、6芐氨基嘌呤、阿維菌素、吡蟲啉、啶蟲脒、多效唑、甲基對硫磷、甲萘威、克百威、腐霉利、甲霜靈、三唑酮、三唑磷、氯蟲苯甲酰胺、滅蠅胺、噻蟲嗪、噻蟲啉、噻蟲胺、噠螨靈、水胺硫磷、聯苯菊酯、烯酰嗎啉、吡唑醚菌酯、4-氯苯氧乙酸鈉、波爾多液、唑蟲酰胺、氟節胺、甲基異柳磷、氟蟲氰、嘧霉胺、霜霉威、赤霉素、氟節胺、腈菌唑、戊唑醇等農藥殘留;
3、水產安全類:呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林、呋喃它酮、孔雀石綠、氯霉素、五氯酚鈉、磺胺、喹諾酮、頭孢氨芐、酰胺類、四環素、甲硝唑、慶大霉素、鏈霉素、甲氧卞胺嘧啶、喹乙醇、紅霉素、替米考星、甲砜霉素、賽跟定、己烯雌酚、阿苯達唑、氟苯尼考、地塞米松、甲基睪酮、睪酮、卡那霉素、新霉素、林可霉素、氯丙嗪、氫化可的松、阿維菌素、氧氟沙星、肉類摻假(摻雞肉)、妥布霉素、阿奇霉素、泰樂菌素、安普霉素、頭孢噻呋、克拉霉素、類固醇激素、重金屬銅、重金屬鉛、重金屬鎘、痢菌凈、組胺、雙氯芬酸鈉、對乙酰氨基酚、吲哚美辛、阿莫西林、替米考新、金剛烷胺等獸藥殘留及抗生素殘留;
4、瘦肉精:克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、苯乙醇胺A等激素殘留類;
5、蜂蜜安全類:氯霉素、喹諾酮、磺胺、青霉素、四環素、甲硝唑蜂蜜、呋喃唑酮蜂蜜、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林等獸藥殘留及抗生素殘留;
6、禽蛋類:喹諾酮、磺胺、青霉素、林可霉素、慶大霉素、四環素、氟苯尼考、卡那霉素、金剛烷胺、氯霉素、泰樂菌素、阿莫西林、替米考新、氟蟲氰、氯羥吡啶、安普霉素、痢菌凈、紅霉素等獸藥殘留及抗生素殘留;
7、色素類:赤蘚紅、堿性橙、檸檬黃、日落黃、蘇丹紅、羅丹明B、硫酸銅、酸性橙等
8、奶類:內酰胺類、四環素、多菌靈、氯霉素、金霉素、土霉素、黃曲霉毒素M1、喹諾酮、磺胺、慶大霉素、卡那霉素、羊奶摻假、林可霉素、三聚氰胺、新霉素、大觀霉素、替米考星、紅霉素、鏈霉素、內酰胺酶、頭孢氨芐、泰樂菌素、地塞米松、苯甲酸、甲硝唑、頭孢噻呋、阿維菌素、駱駝奶摻假、乳品摻奶精、羊奶蛋白、、吡蟲啉、啶蟲脒、布病、重金屬鉛等獸藥殘留及抗生素殘留;
9、飼料安全類:磺胺、喹諾酮、內酰胺類、林可霉素、慶大霉素、四環素、氟苯尼考、卡那霉素、金剛烷胺、氯霉素、三聚氰胺、黃曲霉毒素B1、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、喹乙醇、T2毒素、伏馬毒素、阿苯達唑、地克珠利、尼卡巴嗪、赭曲霉毒素A、氯羥吡啶等獸藥殘留及抗生素殘留;
10、轉基因類:轉基因CP4、轉基因BT、轉基因BAR等轉基因;
11、動物疾病類:牛羊結核、布病、貓瘟、犬細小等動物疾??;
12、其他類:罌粟殼、罌粟堿、喹諾酮、苯甲酸、甜蜜素等有害物質;